금속현미경 사용법
현미경 조직관찰 방법은 대물렌즈의 종류에 따라서 달라진다. 대물렌즈는 두가지 형대가 있는데 하나는 명시야형으로 명시야 조명과 편광조명이 가능한 형식으로 금속관찰용 보통 현미경에 기본으로 장착이 되어 있다. 다른 하나는 멀티형의 대물렌즈인데 명시야, 암시야, 편고아시야, 노마스키DIC의 네가지 형태의 조명이 가능한 고급형이다. 간단한 레버조작으로 상의 종류를 바굴 수가 있어서 편리하고 다양하게 상을 관찰할 수가 있다.
1. 현미경 작동
전 공정으로 만들어진 시편은 광학 현미경으로 관찰한다. 관찰하기 전에 시편이 광축에 수직이 되게 하기 위해 직립형 현미경의 경우는 점토와 평압기를 사용하여야 한다. 시편을 현미경 위에 올려 놓은후 다음 조작에 의해 조직을 관찰한다. 도립형 현미경의 경우는 스테이지에 올려 놓으면 된다.
중심부에 밝은 부분이 위치하게 한 후 저배율에서 대략적인 초점을 맞추고 점차 고배율의 렌즈로 바꾼다. 초점이 맞은 상태에서 조직을 관찰하게 되는데 관찰요령은 다음과 같다.
처음의 관찰배율은 50-100배 정도의 저배율로 하며 점차 고배율로 옮기도록 한다. 그 이유는 처음부터 고배율로 관찰하게 되면 전체적인 조직의 특징을 알 수 없게 되어 국부적으로만 관찰되기 때문이다.
현미경 사진을 촬영할 경우에는 초점을 잘 맞추고 적당한 밝기 등을 조절해서 일반사진을 촬영할 때와 같은 방법으로 촬영한다. 또한 35mm필름을 사용하여 촬영할 때는 고감도 필름(ASA 100이상)이 노출시간도 짧고 시야가 어두울 때도 유리하지만 명암이 약하기 때문에 ASA 50이하의 필름이 좋다.
관찰된 조직은 반드시 부식액, 부식시간, 배율 등을 적어놓도록 한다. 시료의 저지, 초점 조정, 필라멘트 중심 조정, 양안거리 조정 및 시력 보정, 조리개 조절, 조직사진 노출 조절, 조직사진 촬영 등 현미경 관찰의 각 단계의 세부적인 순은 다음과 같다.
가. 시료의 저지
- 광원에 사용되는 램프가 할로겐 램프인지 확인 후 전원을 놓고 규정된 전압까지 조절한다
- 필터 사용은 흑백으로 사진촬영할 때 또는 관찰할 때는 녹색필터로 사용한다.
- 칼라로 조직관찰 및 사진촬영할 때는 청색 필터를 사용한다.
- 검경할 면이 아래로 향하도록 시편을 스테이지에 놓는다(※ 금속현미경은 시료를 도립상태로
놓으므로 평압기나 점토를 사용할 필요가 없다.)
- 스테이지 크립으로 시료를 가볍게 지지 시킨 스태이지 크립을 밀어 내리면 시료는 스테이지에
밀착된다.
나. 초점지정
- 저배율 대물렌즈(배율 5× 또는 10×)가 위치하도록 렌즈 회전판을 돌린다
- 근사 초점 조정장치를 이용하여 대를 낮추어 대략 초점을 맞춘다
- 미세초점 조정장치를 이용하여 접안렌즈를 통해 보면서 상으 초점을 맞춘다.
- 렌즈 회전판을 돌려서 필요한 배율의 대물렌즈를 선택한다. 모든 대물렌즈는 일정한 초점을 갖도록 조정되어 있으므로 어떤 대물렌즈를 택하든지 미세초점 조정장치만 약간 조작해 주어도
초점을 맞출 수 있다.
- 검경할 면이 아래로 향하도록 시편을 스테이지에 놓는다
(※ 금속현미경은 시료를 도립상태로 놓으므로 평압기나 점토를 사용할 필요가 없다.)
- 스테이지 크립으로 시료를 가볍게 지지 시킨 스태이지 크립을 밀어 내리면 시료는 스테이지에 밀착된다.
다. 필라멘트 중심 조정
- 현미경 하단부에 있는 광원 전환 스위츠를 할로겐으로 놓고 메인 스위치를 적당한 밝기가 되도록 시계방향으로 돌린다
- 적당한 반사능을 갖는 시편을 시료대 위에 놓고 필터 빛에 의하여 초점을 맞춘다.
- 쌍안 접안부의 몸체로부터 안쪽 접안경을 빼어내고 그 안을 들여다 본다. 그러면 필라멘트으 확대된 모습을 볼 수 있다, 광원상자의 오른쪽에 위치한 중심 조정노브를 이용하여 시계의 중앙에 상이 오도록 조절한다.
- 중심조정 노브는 등축으로서 같은 노브에 2개의조절장치가 있으므로, 직경이 큰 노브는 수령으로 직경이 작은 노브는 수직으로 움직이게금 할 수 있게 되어 있다.
라. 양안거리 조정 및 시력보정
- 접안경의 양눈을 대고 동시에 들여다 보며 접안경에 동일한 초점이 형성되지 않을 경우 미세초점 장치를 작동
시키지 말고 왼쪽 또는 오른쪽 접안경의 시력 보정용 슬리브를 돌려 양쪽의 초점이 일치할 때까지 완전히 맞추도록 한다.
- 시력은 개인에 따라 차이가 있으므로 시료를 관찰할 때나 특히 사진을 찍고자 할 때 완벽하게 시력 보정을 하지 못한다면 초점이 맞지 않는 사진을 찍는 실수를 범하게 된다.
바. 조직사진 노출 조절
- 노출 조절은 노출기를 사용하면 편리한데, 필름 ASA에 다라, 또한 필름크기에 따라 노출 조절을 한다.
- 현미경 대물렌즈에서 초점을 맞추고 광원을 옮긴 후, 노출기 주 스위치 버튼을 누른다.
- 필름에 표시되어 있는 ASA를 확인 후 ASA 다이얼로 조절한다.
- 어떤 필름크기로 조직사진을 촬영할 것인가 선택후 필름크기 버튼을 누른다. 그러면 지시바늘이 움직여 어떤 위치를 가르키는데 위치에 따라 광량을 조절하여 원하는 노출시간을 조절할 수 있다
- 노출기의 노출시간과 카메라의 노출시간과 동일하게 맞춘다.
사. 조직사진 촬영
- 노출시간을 맞춘후 레버를 "V"(visual)쪽으로 당긴다.
V
- 초점을 미세초점 조정 노브로 정확히 맞추고 스테이지 이동 노브를 사용하여 십자로 이동시키면서 그 시편의 가장 대표할 수 있는 조직을 찾는다.
- 필름을 카메라에 장착시킨다.
- 광원을 "C"(camera)쪽으로 이동시킨 후 카메라를 통해 다시 미세초점을 맞춘다 c
- 필름이 흑백일 경우 초록색 필터를 사용하고 칼라일 경우 청색 필터를 사용한다.
- 노출시간을 결정하고 카메라 셔터를 진동이 없도록 누른다. B셔터는 누르고 있는 동안에 셔터가 열려 있으므로 계속 누르고 있다가 노출기간이 지나면 셔터를 놓는다.
- 촬영이 끝난 다음 현미경의 전원을 차단시키고 카메라를 분리시켜 암실에서 필름을 꺼내도록 한다.
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